簡(jiǎn)述一下現(xiàn)代病理學(xué)的新技術(shù)。
作者：邢亮
來(lái)源：醫(yī)學(xué)界腫瘤頻道
病理學(xué)是用自然科學(xué)的方法研究疾病的形態(tài)結(jié)構(gòu)、代謝和功能等方面的改變，從而揭示疾病的病因、發(fā)病機(jī)制和轉(zhuǎn)歸的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科。組織切片、HE染色、顯微鏡觀察是病理學(xué)的主要檢查方法。
20世紀(jì)60年代的電子顯微鏡技術(shù)的建立，使病理學(xué)研究進(jìn)入到亞細(xì)胞水平，對(duì)疾病的研究從器官、組織、細(xì)胞和亞細(xì)胞水平深入到分子及基因水平，并使形態(tài)學(xué)觀察和研究從定位、定性走向定量。對(duì)于疾病的性質(zhì)和病理分型有了更加準(zhǔn)確的方法，更加有利于臨床治療和靶向藥物的應(yīng)用。
現(xiàn)在，我們就簡(jiǎn)述一下現(xiàn)代病理學(xué)的新技術(shù)。
1.組織化學(xué)
組織化學(xué)染色技術(shù)即一般所說(shuō)的特殊染色。可以應(yīng)用特殊的染色劑定位，顯示出組織和細(xì)胞的特殊化學(xué)成分，對(duì)一些代謝性疾病的診斷有一定的參考價(jià)值。
例如戈謝病，可以用特殊染色顯示出在脾臟和肝臟內(nèi)堆積的葡萄糖腦苷脂。PAS染色可區(qū)別骨Ewing肉瘤和惡性淋巴瘤。PTAH染色可顯示橫紋肌肉瘤中瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的橫紋。
2.免疫組織化學(xué)
免疫組織化學(xué)是利用抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)原理，以抗原或抗體來(lái)檢測(cè)和定位組織中的待測(cè)物質(zhì)。按標(biāo)記物的性質(zhì)可分為熒光法（熒光素標(biāo)記）、酶法（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、免疫金銀及鐵標(biāo)記技術(shù)。
隨著大量商品化的單克隆和多克隆抗體出現(xiàn)、配套試劑盒的使用及方法學(xué)的不斷完善，免疫組織化學(xué)染色已經(jīng)成為病理診斷和研究中必不可少的技術(shù)手段之一，被廣泛應(yīng)用于各種蛋白質(zhì)或肽類(lèi)物質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)、細(xì)胞起源于分化的判定、淋巴細(xì)胞的免疫表型分析、細(xì)胞增值、細(xì)胞周期和信號(hào)傳導(dǎo)等研究。
3.原位雜交技術(shù)
用標(biāo)記了已知序列的核苷酸片段作為探針，通過(guò)雜交直接在組織切片、細(xì)胞涂片或培養(yǎng)細(xì)胞爬片上檢測(cè)和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。如熒光原位雜交（FISH）對(duì)Her-2基因擴(kuò)增進(jìn)行檢測(cè)，可以彌補(bǔ)免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果的不穩(wěn)定。
4.原位多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）
在體外經(jīng)酶促反應(yīng)將某一特定DNA序列進(jìn)行高效、快速擴(kuò)增，可以將單一拷貝或低拷貝的待檢測(cè)核酸以指數(shù)的形式擴(kuò)增而達(dá)到常規(guī)方法可檢測(cè)的水平。是一種可以在冷凍或石蠟包埋組織切片、細(xì)胞涂片或培養(yǎng)細(xì)胞爬片上來(lái)檢測(cè)和定位核酸的技術(shù)。可用于EB病毒、人乳頭狀瘤病毒、肝炎病毒、巨細(xì)胞病毒和人免疫缺陷病毒基因組及結(jié)核、麻風(fēng)桿菌基因的檢測(cè)。
5.顯微切割術(shù)
20世紀(jì)90年代初發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新技術(shù)，可以從組織切片、細(xì)胞涂片上任一區(qū)域內(nèi)切割下幾百個(gè)、幾十個(gè)同類(lèi)細(xì)胞，或單個(gè)細(xì)胞甚至目標(biāo)染色體，再進(jìn)行有關(guān)的分子生物學(xué)方面的研究。比如可用CD15、CD30單克隆抗體染色切割霍奇金淋巴瘤組織切片上的R-S細(xì)胞。
6.激光掃描共聚焦顯微術(shù)
采用激光作為光源，在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計(jì)算機(jī)對(duì)所觀測(cè)的對(duì)象進(jìn)行數(shù)字圖像處理的一套觀察、分析和輸出系統(tǒng)。可以對(duì)樣品進(jìn)行無(wú)損傷地?cái)鄬訏呙韬统上瘢杂^察、分析細(xì)胞的三維空間結(jié)構(gòu)，與其他技術(shù)相結(jié)合還可實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞的動(dòng)態(tài)觀察、多重免疫熒光標(biāo)記或離子熒光標(biāo)記，研究活細(xì)胞功能與代謝過(guò)程。
7.流式細(xì)胞學(xué)（FCM）
一種可以對(duì)細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測(cè)量的新型分析技術(shù)與分選技術(shù)。在定性、定量分析的基礎(chǔ)上，可以將不同的細(xì)胞或微粒亞群分選出來(lái)，經(jīng)收集進(jìn)一步培養(yǎng)或觀測(cè)。可以分析細(xì)胞周期、分析細(xì)胞的增殖與凋亡、分析細(xì)胞分化及鑒別良惡性腫瘤、分選細(xì)胞或微粒、分析藥物在細(xì)胞中的含量、分布及作用機(jī)制。
8.比較基因組雜交
通過(guò)單一的一次雜交可對(duì)某一腫瘤整個(gè)基因組染色體拷貝數(shù)量的變化進(jìn)行檢查。如對(duì)肺的小細(xì)胞癌的原發(fā)癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)二者為單一克隆關(guān)系。
9.細(xì)胞生物芯片技術(shù)
是利用微點(diǎn)陳技術(shù)將多種生物探針高密度地固定在固相基質(zhì)上，達(dá)到一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)多種疾病或分析多個(gè)生物樣本的目的。對(duì)于科研、開(kāi)發(fā)、疾病的分子診斷、預(yù)后分析、藥物治療靶點(diǎn)的篩選、組織分布、細(xì)胞定位、抗藥體和新藥的篩選等方面均具有十分廣泛的實(shí)用價(jià)值。
10.動(dòng)物活體成像技術(shù)
應(yīng)用影像學(xué)方法，對(duì)活體狀態(tài)下的生物過(guò)程進(jìn)行的細(xì)胞和分子水平的定性和定量研究。主要分為光學(xué)成像、核素成像、磁共振成像、超聲成像及CT成像五大類(lèi)。可以觀察活體動(dòng)物體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移、感染性疾病發(fā)展過(guò)程、特定基因的表達(dá)等生物學(xué)過(guò)程。
11.圖像分析技術(shù)
利用圖像分析儀或圖像分析系統(tǒng)解決“如何客觀而精確地用數(shù)字來(lái)表達(dá)存在于標(biāo)本中的各種形態(tài)學(xué)與含量為主的信息”的問(wèn)題。可以用于細(xì)胞核形態(tài)參數(shù)的測(cè)定（如直徑、周長(zhǎng)、面積、體積等）、DNA倍體的測(cè)定和顯色反應(yīng)（如免疫組化）的定量，甚至輔助腫瘤的組織病理學(xué)分級(jí)和預(yù)后判斷等。
12.體視學(xué)技術(shù)
維形態(tài)定量特征的方法。可以用三維定量數(shù)據(jù)來(lái)表達(dá)特征結(jié)構(gòu)信息。
13.電子顯微鏡技術(shù)
利用電子顯微鏡觀察經(jīng)特殊制備的樣本微細(xì)結(jié)構(gòu)與形態(tài)的技術(shù)。在臨床上可用于多種疾病亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)病變的觀察和診斷，特別是腎小球疾病和肌病的診斷，以及一些疑難腫瘤的組織來(lái)源和細(xì)胞屬性判定，如一些去分化、低分化或多向分化腫瘤的診斷和鑒別診斷。
以上就是近幾年病理學(xué)常用的診斷技術(shù)。這些技術(shù)有的主要用于特殊實(shí)驗(yàn)室，有的已經(jīng)配備于基層病理科，提高了診斷的準(zhǔn)確性和精密性，使病理學(xué)從細(xì)胞水平進(jìn)入到亞細(xì)胞和分子水平。為臨床提供了更準(zhǔn)確和更有價(jià)值的資料，使腫瘤的分子靶向藥物打的更準(zhǔn)、作用更直接。
而所有的這一切都得益于越來(lái)越先進(jìn)的診療技術(shù)，所謂魔高一尺，道高一丈，相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)，會(huì)有更加先進(jìn)的技術(shù)，讓我們拭目以待吧！
